1.差速離心:逐次增加離心力,每次可沉降樣品溶液(yè)中(zhōng)的一些(xiē)組份(fèn)。
差(chà)速離心是一種最常用的方法。在這種方法(fǎ)中,離心管(guǎn)在開始時裝滿(mǎn)了均一的樣品溶液。通過在一定速(sù)度下一定(dìng)時間的離心後,就可得到兩個部(bù)份:沉澱和
上清液。
通常在(zài)第一次離心時把大部分不需要的大(dà)粒子沉降去掉。這時所需的組份大部分仍留在上清液中。然後將收集到的上清液以更高速度離心,把所需的粒子沉積
下來(lái)。離心的時間要選擇得當,使大部份不需要的(de)更(gèng)小的粒子仍(réng)留(liú)在上清液中。對於得到的沉澱和上清液可以進(jìn)行(háng)進一步的離心,直到達到所需要的分離純度為止。
差(chà)速離(lí)心的特(tè)點(diǎn)是操作簡單,但分離純度不高。
2.密度梯度離心法:可(kě)以同(tóng)時使樣品中幾個或全部組份分離,具有很好的分辨率。
(1)速率區帶法:
根據樣品中不同粒子所具有的不同的(de)尺寸大小及沉(chén)降速度(S)。
大致(zhì)步驟如下:
在離心管中裝(zhuāng)入(rù)密度梯度溶液,溶液的密度從離心管頂部至底部逐漸增加(正梯度)。
將所需分離的樣品小心地加至密度梯度溶液的頂部。樣品(pǐn)在梯度溶液表麵形成一負(fù)梯度。
由於不同(tóng)大小的粒子在離心力作用下,在梯度中移動(dòng)的速度(dù)不一樣(yàng),所以(yǐ)經過離心後會(huì)形成幾條分開的樣品區帶。
樣品粒子的密度必須大於梯度液注中任一點的密度。離心過程必須在(zài)區帶到達管子底部前停止。
(2)等密度離心法:
根據粒子的不同密度來分離。離(lí)心過程中,粒子會移至與它本身密度相同的地方形成區帶。
密度樣度的選擇要使梯度(dù)的範圍包括所有待分離粒子的(de)密度。樣品可以在密度梯度(dù)液粒上(shàng)麵(miàn)或均勻分布在密度(dù)梯度中。經離心後,樣品粒子達到它們的平衡點。
平(píng)衡後粒子的(de)分離完全由其密度決定(dìng),與時間無關,此時再改變離心轉速,隻能改(gǎi)變區帶的相對位(wèi)置。